[Vídeo] 8 – Alcian Blue pH2,5 – PAS

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[Vídeo] 8 – Alcian Blue com PAS para a visualização de mucopolissacarídio.

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Description

Alcian Blue pH 2,5 – PAS

Alcian Blue pH 2,5 – PAS

Código EP-11-20019

  • Quantidade de testes : Mínimo de 60 testes*

  • Tempo total do procedimento : 1 hora e 10 minutos

  • Validade do produto : ver frasco

  • Temperatura de armazenamento : 15 a 25°C (temperatura ambiente)

  • Equipamentos complementares : Não necessita

Aplicação

Método combinado para demonstrar mucinas ácidas, mucinas neutras e carboidratos nos tecidos.

Princípio

Na primeira parte do procedimento, os cortes são tratados com Alcian blue e as mucinas ácidas são coradas e formam com o corante o complexo insolúvel “azul Monastral”, que posteriormente não é afetado pela segunda parte do procedimento, quando a reação PAS irá apenas corar mucinas neutras e glicogênio (glicogênio apenas será corado se os cortes não forem previamente tratados com digestão enzimática com diastase).

Método

  1. Desparafinizar as lâminas em xilol por 5 (cinco) minutos.

  2. Hidratar as lâminas em série de álcool 99%, álcool 96% e álcool 70% (2 vezes).

  3. Lavar as lâminas em água destilada por 2 minutos. Após, secar as lâminas.

  4. Colocar na seção de tecido 10 gotas do reagente A (ou o suficiente apenas para cobrir o corte), deixar agir por 5 minutos.

  5. Lavar as lâminas em água corrente por 3 (cinco) minutos. Após, secar as lâminas

  6. Colocar na seção de tecido 10 gotas do reagente B (ou o suficiente apenas para cobrir o corte), deixar agir por 10 minutos.

  7. Lavar as lâminas em água corrente por 3 minutos. Após, secar as lâminas.

  8. Colocar na seção de tecido 10 gotas do reagente C (ou o suficiente apenas para cobrir o corte), deixar agir por 15 minutos.

  9. Lavar as lâminas em água corrente por 5 minutos. Após, secar as lâminas.

  10. Colocar na seção de tecido 10 gotas do reagente D (ou o suficiente apenas para cobrir o corte), deixar agir por 4 minutos.

  11. Lavar as lâminas em água corrente por 3 minutos. Após, secar as lâminas

12. Desidratar as lâminas em série de álcool ascendente até o xilol e efetuar a montagem com ERV-MOUNT.

* Quantidade de teste estimada conforme o tamanho do tecido a ser corado, quanto maior o tecido maior será o volume necessário para realizar a coloração e menor será a quantidade de testes. Veja maiores detalhes no verso “INSTRUÇÕES GERAIS”.

Resultados (veja item coloração final no verso “INSTRUÇÕES GERAIS)

Mucopolissacarídeos ácidos……………………………………………………………………………………………………………………………………….. azul turquesa

Algumas mucinas e cartilagens………………………………………………………………………….…………………………………………………..roxo / azul escuro

Substâncias P.A.S. Positivas………………………………………………………………………………..………………………………………………magenta/ vermelho

Reagentes

A (tampa azul) Alcian blue pH 2,5……………….30 ml C (tampa vermelha) Reagente de Schiff..………………30 ml

B (tampa branca) Ácido Periódico…….…………30 ml D (tampa verde) Hematoxilina de Carazzi..……………30 ml

Referências

Armed Forces Institute of Pathology: Laboratory Methods in Histotechnology, Washington D.C.; 1994.

Mowry RW. Alcian blue-periodic acid Schiff stain for carbohydrates Dept of Path Univ. of Alabama Med. Center 1956; Birmingham.

Spicer SS, Warren L. The histochemistry of sialic acid containing mucoproteins, J Histochem Cytochem 1960, 8: 135-137.

INSTRUÇÕES GERAIS

Para a obtenção de um melhor resultado da metodologia e uma completa compreensão da terminologia utilizada, nós recomendamos as seguintes indicações:

Número de testes realizados

O número mínimo de testes foi calculado com 10 gotas de reagente de cada kit, que permite cobrir facilmente seções de tecidos médias ou grandes, aconselhamos seguir esta quantidade de reagentes. Em casos de seções pequenas, no entanto, pode-se utilizar menos de 10 gotas, neste caso é necessário reduzir a quantidade de todos os outros reagentes para evitar desequilíbrios.

Tempo de execução

O tempo de execução foi calculado somando-se a duração de todas as etapas do método. Ele não inclui o tempo de desparafinizar, hidratar e desidratar o corte.

Coloração final

A metodologia do kit foi padronizada a uma temperatura média de 20ºC e em condições normais de trabalho, utilizando-se os produtos indicados nesta literatura. Pode ocorrer uma pequena variação na coloração final, devido principalmente a variação da temperatura, ocorrendo esta variação deve-se alterar o tempo utilizado em cada reagente, com o objetivo de intensificar ou diminuir a coloração.

Validade

Indica o tempo em que produto permanece inalterado a partir de sua fabricação, se armazenado adequadamente. Cada Kit possui uma etiqueta com identificação do lote e data de vencimento.

Equipamento básico

Todo Kit necessita do seguinte equipamento:

  • Cuba de coloração horizontal ou uma bandeja de coloração horizontal, comercializada pelo Grupo Erviegas, código EP-51-05021.

  • Uma garrafa de lavagem (pulverizador) com água destilada para as lavagens requeridas na metodologia de cada kit, ou como alternativa, uma cuba vertical (jarra de Coplin) para as lavagens por imersão, comercializada pelo Grupo Erviegas código EP-51-30352.

Duas séries de solventes, conforme metodologia de cada kit:

  • DESCEDENTE: para desparafinizar e levar os cortes das seções para água destilada, composta de: xilol (x2), etanol absoluto (x2), etanol a 96%, etanol a 70% e água destilada.

  • ASCENDENTE: para desidratar e limpar, composta de: etanol a 70%, etanol a 96%, etanol absoluto (x2) e xilol (x2).

Aconselhamos o uso do meio de montagem ERV-MOUNT, comercializado pela Grupo Erviegas código EP-51-05042 frasco com 500ml e EP-51-05041 frasco com 100ml.

Equipamento complementar

Nas literaturas de cada kit constam os equipamentos complementares que podem ser necessários, e que não constam no Kit, mas que estão normalmente presentes em qualquer laboratório.

Fixação e meios de inclusão

Os tempos dos métodos dos kits foram determinados a partir de cortes histológicos de fragmentos fixados em formol tamponado com pH 7 com tampão fosfato e inclusos em parafina. A utilização de outros fixados nas práticas histológicas comuns (piocromoformol de Bouin, B5) pode ser vantajosa em alguns métodos (por exemplo para os tricrômeros), mas não são aconselhadas para outros métodos.

Garantia Grupo Erviegas

O Grupo Erviegas garante o funcionamento do produto conforme especificado nesta literatura. Para maiores informações sobre o produto ou detalhes sobre outras técnicas e produtos acesse nosso site www.grupoerviegas.com.br.

RUO – ISENTO DE REGISTRO NA ANVISA

Instruções em PDF–> EP-11-20019 – Alcian Blue – PAS – Rev 03-2019

Acesso por 3 meses

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