[Vídeo] 3 – PERLS

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Description

PERLS (método para ferro férrico e tecido conjuntivo)

PERLS (method for ferric iron and connective tissue)

Código EP-11-20015

  • Quantidade de testes : Mínimo de 60 testes*

  • Tempo total do procedimento : 35 minutos (aproximadamente)

  • Validade do produto : ver frasco

  • Temperatura de armazenamento : 15 a 25°C (temperatura ambiente)

  • Equipamentos complementares : Ver Instruções Gerais

Aplicação

Para demonstrar ferro férrico, colágeno e tecido conjuntivo em cortes histológicos.

Princípio

O ferrocianeto de potássio reage com ferros férricos de hemossiderina em ambiente ácido para formar um sal colorido: Azul Prussiano. A reação ocorre na forma iônica como segue:

4Fe+++ + 3 K4FeCN6 = Fe4 (Fe CN6)3 + 12K+

Cuidados

Reações falso-positivas se devem a 3 causas principais:

– solução está muito velha (solução de ácido ferrocianeto deve ser preparada imediatamente antes de sua utilização);

– ferros férricos contaminam vidrarias ou a água de banho de flutuação (ferrugem). Para evitar isto, jamais toque a solução com objetos metálicos;

– asbestose : amianto pode estar presente em tecidos patológicos e sais férricos em suas fibras podem reagir positivamente.

Método

  1. Desparafinizar as lâminas em xilol por 5 minutos. Após, hidratar as lâminas em álcool 99%, 95%, 70% e lavar em água corrente.

  2. Fazer a junção dos reagentes A e B em um becker pequeno em igual proporção, colocar na seção do tecido 10 gotas da solução obtida com a junção dos reagentes A+B (ou a quantidade suficiente apenas para cobrir o corte), deixar reagir por 30 minutos.

  3. Lavar em água destilada e secar as lâminas.

  4. Colocar na seção do tecido 10 gotas do reagente C (ou a quantidade suficiente apenas para cobrir o corte) e deixar reagir por 2 minutos.

  5. Lavar em água destilada e secar as lâminas.

  6. Desidratar as lâminas em série de álcool 70%, 96% e 99% até o xilol.

  7. Efetuar a montagem das lâminas com ERV-MOUNT.

* Quantidade de teste estimada conforme o tamanho do tecido a ser corado, quanto maior o tecido maior será o volume necessário para realizar a coloração e menor será a quantidade de testes. Veja maiores detalhes no verso “INSTRUÇÕES GERAIS”.

Resultados (veja item coloração final no verso “INSTRUÇÕES GERAIS)

Ferro (positivo)…………………………………………………………………………………………………….…………………………………………………………….azul

Outras estruturas……………………………………………………………………………………………………………………………………………………… vermelho

Reagentes

A (tampa amarela) – Ferrocianeto de Potássio…………………………….30ml

B (tampa branca) – Ácido Clorídrico………………………………..………….30ml

C (tampa vermelha) – Carmalumem de Mayer……………………………..30ml

INSTRUÇÕES GERAIS

Para a obtenção de um melhor resultado da metodologia e uma completa compreensão da terminologia utilizada, nós recomendamos as seguintes indicações:

Número de testes realizados

O número mínimo de testes foi calculado com 10 gotas de reagente de cada kit, que permite cobrir facilmente seções de tecidos médias ou grandes, aconselhamos seguir esta quantidade de reagentes. Em casos de seções pequenas, no entanto, pode-se utilizar menos de 10 gotas, neste caso é necessário reduzir a quantidade de todos os outros reagentes para evitar desequilíbrios.

Tempo de execução

O tempo de execução foi calculado somando-se a duração de todas as etapas do método. Ele não inclui o tempo de desparafinizar, hidratar e desidratar o corte.

Coloração final

A metodologia do kit foi padronizada a uma temperatura média de 20ºC e em condições normais de trabalho, utilizando-se os produtos indicados nesta literatura. Pode ocorrer uma pequena variação na coloração final, devido principalmente a variação da temperatura, ocorrendo esta variação deve-se alterar o tempo utilizado em cada reagente, com o objetivo de intensificar ou diminuir a coloração.

Validade

Indica o tempo em que produto permanece inalterado a partir de sua fabricação, se armazenado adequadamente. Cada Kit possui uma etiqueta com identificação do lote e data de vencimento.

Equipamento básico

Todo Kit necessita do seguinte equipamento:

  • Cuba de coloração horizontal ou uma bandeja de coloração horizontal, comercializada pelo Grupo Erviegas, código EP-51-05021.

  • Uma garrafa de lavagem (pulverizador) com água destilada para as lavagens requeridas na metodologia de cada kit, ou como alternativa, uma cuba vertical (jarra de Coplin) para as lavagens por imersão, comercializada pelo Grupo Erviegas código EP-51-30352.

Duas séries de solventes, conforme metodologia de cada kit:

  • DESCEDENTE: para desparafinizar e levar os cortes das seções para água destilada, composta de: xilol (x2), etanol absoluto (x2), etanol a 96%, etanol a 70% e água destilada.

  • ASCENDENTE: para desidratar e limpar, composta de: etanol a 70%, etanol a 96%, etanol absoluto (x2) e xilol (x2).

Aconselhamos o uso do meio de montagem ERV-MOUNT, comercializado pela Grupo Erviegas código EP-51-05042 frasco com 500ml e EP-51-05041 frasco com 100ml.

Equipamento complementar

Nas literaturas de cada kit constam os equipamentos complementares que podem ser necessários, e que não constam no Kit, mas que estão normalmente presentes em qualquer laboratório.

Fixação e meios de inclusão

Os tempos dos métodos dos kits foram determinados a partir de cortes histológicos de fragmentos fixados em formol tamponado com pH 7 com tampão fosfato e inclusos em parafina. A utilização de outros fixados nas práticas histológicas comuns (piocromoformol de Bouin, B5) pode ser vantajosa em alguns métodos (por exemplo para os tricrômeros), mas não são aconselhadas para outros métodos.

Garantia Grupo Erviegas

O Grupo Erviegas garante o funcionamento do produto conforme especificado nesta literatura. Para maiores informações sobre o produto ou detalhes sobre outras técnicas e produtos acesse nosso site www.grupoerviegas.com.br.

RUO – ISENTO DE REGISTRO NA ANVISA

Instruções em PDF–> EP-11-20015 – Perls – Rev 12-2018

Acesso por 3 meses

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